胱天蛋白酶的活化在細胞凋亡中發(fā)揮著主要作用。FITC-C6-DEVD-FMK提供了在活細胞中靈敏檢測活化的胱天蛋白酶-3的方便手段。FITC-DEVD-FMK是細胞滲透性的，無毒的，并且不可逆地結(jié)合到活化的胱天蛋白酶-3在細胞凋亡。在FITC標(biāo)記的可用于直接檢測活化的胱天蛋白酶的凋亡細胞可通過熒光顯微鏡，流式細胞儀，或熒光板讀數(shù)器進行。

操作方法

以下協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測定

1.在DMSO中準(zhǔn)備10 mM的儲備溶液。

2.如下準(zhǔn)備2X半胱天冬酶底物（50 μM）分析溶液：50 μL底物原液，100 μL DTT（1M），400 μL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時。

4.使用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光，或使用酶標(biāo)儀監(jiān)測吸光度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針的細胞Caspase測定

1.在DMSO中準(zhǔn)備2-5 mM的儲備溶液。

2.根據(jù)需要處理細胞。

3.通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 μM）分析溶液。

4.將等體積的處理過的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細胞至少1小時。

5.用HHBS清洗細胞至少一次。

6.通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞半胱天冬酶測定（僅適用于＃13470-13476）

1.通過向小瓶中加入50 μL DMSO制備250X儲備液。

2.根據(jù)需要處理細胞。

3.以1：250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中（例如2 μL至500 μL細胞），并將細胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時。

4.用HHBS清洗細胞至少一次。

5.通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強度。