這種綠色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（相當于FITC標記的鬼筆環(huán)肽）會(huì )選擇性結合F-肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養或無(wú)細胞實(shí)驗中用于標記、鑒定和定量F-肌動(dòng)蛋白的便捷探針。

操作步驟

1.制備1000 X鬼筆環(huán)肽DMSO儲備液：將30μLDMSO加入小瓶中。

2.制備1X鬼筆環(huán)肽結合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽結合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。

注意1：鬼筆環(huán)肽結合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類(lèi)型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽結合物工作溶液的濃度的制備需要根據實(shí)際而定。

3.染色細胞：

3.1執行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會(huì )在固定過(guò)程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞（步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液（來(lái)自步驟1）加入固定的細胞（來(lái)自步驟2.2或2.3）中，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過(guò)量的鬼筆環(huán)肽結合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。