該試劑盒使用專(zhuān)有染料，可根據線(xiàn)粒體膜電位梯度選擇性累積在線(xiàn)粒體中。線(xiàn)粒體指示劑是一種疏水性化合物，可以很容易地滲透完整的活細胞，并在進(jìn)入細胞后被保留在線(xiàn)粒體中，該熒光線(xiàn)粒體指示劑長(cháng)時(shí)間保留在線(xiàn)粒體中，因為該指示劑帶有定位細胞的基團，這一關(guān)鍵特征顯著(zhù)提高了染色效率。該試劑盒設計十分穩定，需要很少的動(dòng)手操作時(shí)間。它適用于各種熒光平臺，如酶標儀分析、免疫組化和流式細胞術(shù)；它廣泛用于多種熒光研究，包括細胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細胞活力、細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細胞標記方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。

樣品分析

1.準備線(xiàn)粒體染色溶液：

1.1將所有組件溫度調至室溫。

1.2通過(guò)將20μLMitolite Red（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個(gè)96孔板，20μL的500X Mitolite Red（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Red。避光，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光線(xiàn)粒體指示劑的最佳濃度根據具體應用而變化。可以根據特定細胞類(lèi)型和細胞或組織對探針的滲透性來(lái)修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時(shí)，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來(lái)自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO₂培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長(cháng)培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注意：如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長(cháng)培養基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來(lái)自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO₂培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長(cháng)培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注1：如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議增加標記濃度或培養時(shí)間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著(zhù)在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過(guò)的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見(jiàn)步驟2.1）。