活性氧(ROS)是含氧的化學(xué)反應性分子(如超氧化物,羥基,單線(xiàn)態(tài)氧和過(guò)氧化物)。由于存在不成對的價(jià)電子,ROS具有高反應性。 ROS形成氧的正常代謝的天然副產(chǎn)物,并且在細胞信號傳導和體內平衡中具有重要作用。然而,在環(huán)境壓力(例如,UV或熱暴露)期間,ROS水平可顯著(zhù)增加。這可能導致細胞結構的顯著(zhù)損害。累積地,這被稱(chēng)為氧化應激。 ROS也由外源性源如電離輻射產(chǎn)生。在氧化應激條件下,ROS產(chǎn)生顯著(zhù)增加,導致隨后膜脂,蛋白質(zhì)和核酸的改變。這些生物分子的氧化損傷與衰老以及各種病理事件有關(guān),包括動(dòng)脈粥樣硬化,致癌作用,缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病。細胞滲透性ROS Brite APF和HPF試劑是非熒光的并且在與羥基自由基或過(guò)氧亞硝酸根陰離子反應時(shí)產(chǎn)生亮綠色熒光(激發(fā)/發(fā)射= 490 / 515nm),APF也將與次氯酸根陰離子(OCl-)反應。此外,APF和HPF在過(guò)氧化物酶存在下也與過(guò)氧化氫反應。可以使用熒光成像,高內容成像,微孔板熒光測定法或流式細胞術(shù)測量所得熒光。 APF和HPF顯示出對光誘導氧化的相對高的抗性。 APF和HPF在與羥基或過(guò)氧亞硝酸根陰離子反應之前是非熒光的。
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格 |
R0102 | ROS Brite 活性氧 熒光探針APF | 1 mg | 1896RMB |
ROS Brite 染料的分析方案
該方案僅提供指南,實(shí)際應根據您的具體需求進(jìn)行修改。在制備ROS Brite 工作溶液之前,根據需要處理細胞。
1)在DMSO中制備10至20mM ROS Brite APF(或HPF)儲備溶液。通過(guò)將DMSO儲備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液(HHBS)的Hanks溶液中,制備1至10μM的工作溶液。
2)根據需要處理細胞(例如,用50-100nM血管緊張素II處理RASM細胞3-5小時(shí))。
3)用ROS Brite APF(或HPF)(1-10μM,步驟#1)在37℃孵育細胞20-60分鐘。
4)用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。
5)用適當的熒光儀器在Ex / Em = 490 / 525mm(截止= 515nM)下用底部讀取模式分析細胞(例如,用于熒光顯微鏡的FITC濾光片,用于流式細胞儀的FL1濾光片)。
注意:BSA和酚紅會(huì )影響熒光,應謹慎使用。 APF和HPF均可用于溶液測定或細胞內測量。