該特定試劑盒設計用于在Ex / Em =630/650nm處以大斯托克斯位移的近紅外熒光標記活細胞的溶酶體。該試劑盒使用專(zhuān)有的溶解性染料，可能通過(guò)溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。溶致指示劑，一種疏水性化合物，很容易滲透完整的活細胞，并被困在溶酶體內。進(jìn)入溶酶體后，其熒光顯著(zhù)增強。這一關(guān)鍵特征顯著(zhù)降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該套件提供所有必要組件。 它適用于懸浮細胞和貼壁細胞。

操作方法

1.準備溶酶體染色溶液：

1.1解凍LysoBrite NIR（組分A）至室溫。

1.2通過(guò)將20μLLysoBrite NIR（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個(gè)96孔板，20μLLysoBrite NIR（組分A）就足夠了。 將未使用的LysoBrite NIR（組分A）等分并儲存在<-20℃。 避光，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類(lèi)型和細胞或組織對探針的滲透性來(lái)修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時(shí)，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來(lái)自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO₂培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。使用配有Cy5濾光片的熒光顯微鏡觀(guān)察細胞。

注意：如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1,000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱的生長(cháng)培養基中輕輕重懸細胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來(lái)自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO₂培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。使用配有Cy5濾光器的熒光顯微鏡觀(guān)察細胞。

注1：如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議增加標記濃度或培養時(shí)間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著(zhù)在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過(guò)的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色（見(jiàn)步驟2.1）。