該特定試劑盒設計用于在Ex / Em =445/503nm處以大斯托克斯位移的綠色熒光標記活細胞的溶酶體。該試劑盒使用專(zhuān)有的溶解性染料,可能通過(guò)溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。溶致指示劑,一種疏水性化合物,很容易滲透完整的活細胞,并被困在溶酶體內。進(jìn)入溶酶體后,其熒光顯著(zhù)增強。這一關(guān)鍵特征顯著(zhù)降低了其染色背景,使其可用于多種研究,包括細胞粘附,趨化性,多藥耐藥性,細胞活力,細胞凋亡和細胞毒性。該套件提供所有必要組件。 它適用于懸浮細胞和貼壁細胞。
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格 |
C0402 | Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 綠色熒光 | 500 Tests | 1896RMB |
操作方法
1.準備溶酶體染色溶液:
1.1解凍 Lysolite Green(組分A)至室溫。
1.2通過(guò)將20μLLysolite Green(組分A)稀釋到10mL活細胞染色緩沖液(組分B)中制備染料工作溶液。
注1:對于一個(gè)96孔板,20μLLysolite Green(組分A)就足夠了。 將未使用的Lysolite Green(組分A)等分并儲存在<-20℃。 避光,避免反復凍融循環(huán)。
注2:熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類(lèi)型和細胞或組織對探針的滲透性來(lái)修改染色條件。
2.準備和染色細胞:
2.1對于粘附細胞:在96孔黑色壁/透明底板(100μL/孔/ 96孔板)中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時(shí),加入等體積(如100μL/孔/ 96孔板)的染料加工溶液(來(lái)自步驟1.2)。將細胞在37℃,5%CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。使用配有FITC過(guò)濾器組的熒光顯微鏡觀(guān)察細胞。
注意:如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,建議增加標記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞:以1,000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱的生長(cháng)培養基中輕輕重懸細胞沉淀,然后加入等體積的染料加工溶液(來(lái)自步驟1.2)。將細胞在37℃,5%CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。使用配有FITC過(guò)濾器組的熒光顯微鏡觀(guān)察細胞。
注1:如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,建議增加標記濃度或培養時(shí)間以使染料積累。
注2:懸浮細胞可以附著(zhù)在用BD Cell-Tak?(BD Biosciences)處理過(guò)的蓋玻片上,并作為貼壁細胞染色(見(jiàn)步驟2.1)。