該特定試劑盒設計用于在Ex / Em =575/597nm處以大斯托克斯位移的紅色熒光標記活細胞的溶酶體。該試劑盒使用專(zhuān)有的溶解性染料，可能通過(guò)溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。該指示劑中的溶質(zhì)，是一種疏水性化合物，很容易滲透到完整的活細胞，并被保留在溶酶體內一段時(shí)間。進(jìn)入溶酶體后，其熒光顯著(zhù)增強。這一關(guān)鍵特征顯著(zhù)降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒提供所有必要組件。 它適用于懸浮細胞和貼壁細胞。

樣品示例及使用方法

1.準備溶酶體染色溶液：

1.1  取出試劑盒中A、B組分，室溫避光靜置5-10min。

1.2  移取20μLLysoBrite Red（組分A），用10mL活細胞染色緩沖液（組分B）進(jìn)行稀釋?zhuān)苽淙玖瞎ぷ饕骸?/span>

注意：1) 20μL的500XLysoBrite Red （組分A）足夠完成一個(gè)96孔板，根據要求分裝并儲存未使用的500XLysoBrite Red（組分A）,避免反復凍融。

        2)熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據實(shí)際應用而改變，可以根據探針的滲透性對細胞類(lèi)型、細胞或組織的染色條件進(jìn)行調整。

2.細胞染色：

2.1對于貼壁細胞：

在96黑色/透明微孔板（100μL/孔/ 96孔板）或裝有適當培養基內的培養皿的蓋玻片上培養細胞，當細胞達到所需的匯合時(shí)，在96孔板或培養皿內加入等量的LysoBrite Red工作液，在37℃、5％CO₂條件下培養箱中孵育30分鐘，用預溫(37°C) Hanks和20 mM Hepes緩沖液(HBSS)或自配的緩沖液清洗細胞兩次，用HBSS或生長(cháng)培養基填充細胞孔，再使用配有TRITC過(guò)濾器組的熒光顯微鏡觀(guān)察細胞，使之帶紅色熒光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意：1）如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議適當增加染料濃度或孵育時(shí)間。

2.2對于懸浮細胞：

向細胞中加入等量的LysoBrite Red工作液。在37℃、5％CO₂條件下培養箱中孵育30分鐘，用預溫(37°C) Hanks和20 mM Hepes緩沖液(HBSS)或自配的緩沖液清洗細胞兩次，用HBSS或生長(cháng)培養基填充細胞孔，再使用配有TRITC過(guò)濾器組的熒光顯微鏡觀(guān)察細胞，使之帶紅色熒光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意:  1）如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議適當增加染料濃度或孵育時(shí)間。

         2）懸浮細胞可以附著(zhù)在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過(guò)的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色。